Главная


лечение ушибов суставов;топливные гранулы в Чехове;Продажа искусственных новогодних елок. Оптовая продажа искусственных елок по хорошей цене.

Разделение клеток иммунной системы

Разделение клеток при помощи адгезии
Разделение клеток на аффинных колонках
Разделение клеток методом цитолиза
Разделение клеток при помощи розеткообразования
Разделение клеток в градиенте плотности
Разделение при помощи лектинов
Электрофорез, сортировка и разделение клеток на монослое

Разделение клеток иммунной системы представляет собой необходимую предпосылку для исследований функциональной роли отдельных типов клеток, их кооперативного взаимодействия, дифференцировки и т. д. В конце 60-х годов было обнаружено, что малые лимфоциты являются гетерогенной популяцией, состоящей по меньшей мере из двух классов. С этого момента началось бурное развитие методов разделения иммунокомпетентных клеток. Результатом этих исследований стало обнаружение новых субпопуляций лимфоцитов, весьма различных в функциональном отношении. Исследования в этой области продолжаются.

Следует подчеркнуть, что далеко не всегда в специальной литературе правильно используется термин «популяция». Довольно часто клетки относят к разным субпопуляциям только на основании определенных физических параметров фракционирования, не обременяя себя поиском доказательств того, что эти субпопуляции принадлежат к одной и той же разновидности клеток, находящихся на разных стадиях дифференцировки или активации. К числу новых методов, появившихся в последнее время, следует в первую очередь отнести те, которые основаны на использовании лектинов. Мы ограничимся описанием важнейших, относительно простых, в определенной мере рутинных методов работы и не будем касаться таких сложных процессов, как флюоресцентно-активационное разделение клеток, которое можно освоить только, работая под непосредственным наблюдением более опытного экспериментатора.

Схема физических и биохимических свойств клеток иммунной системы

Схема физических и биохимических свойств клеток иммунной системы

Fc—Fc-рецептор; Гис — гистамии; АГ — антиген; Mlg — мембранный иммуноглобулин; С — рецептор комплемента; Эр — эритроцит; ФАСК — флюоресцентно-активационная сортировка клеток.

На рисунке схематически изображены способы разделения клеток, основанные на физических и биохимических принципах. Здесь речь также идет только о наиболее существенных комбинациях. Один и тот же признак может быть выражен в разной степени на клетках одного типа, кроме того, клетки довольно сильно меняются в процессе дифференцировки и выделяемая популяция может оказаться загрязненной.

Понятие «рецептор» означает «место связывания», независимо от типа биологического процесса, в котором он участвует. До настоящего времени остаются неизученными рецепторы эритроцитов. Известно, что лектины, например, реагируют с углеводными компонентами клеточной мембраны, вероятно, эритроциты через углеводные компоненты собственной мембраны вступают во взаимодействие с соответствующими мембранами лимфоцитов. Ввиду того что исследования в области клеточной иммунологии проводятся повсеместно, получаемые иногда противоречивые результаты довольно скоро получают объяснения. Зачастую речь идет о кажущихся противоречиях, которые возникают вследствие двух основных причин.

1. Различия между процессами in vivo и in vitro. Все больше появляется доказательств того, что культура клеток дает очень ограниченное представление о сложных процессах, происходящих в целом организме.

2. Видовое и органное происхождение клеток. Несмотря на общие принципы организации иммунной системы у млекопитающих, даже у близкородственных видов могут наблюдаться поразительные отличия в тонкой организации функций, которые иногда становятся источником ошибочных интерпретаций. В качестве примера можно назвать совершенно различное распределение Θ-антигенов у мыши и крысы или различия в строении Fc-рецепторов Т- и В-лимфоцитов мыши и человека. В качестве причин ошибок при разделении клеточных элементов часто выступают подлинные артефакты. Причины эти следующие:

а) недостаточные знания об адгезионных свойствах и селективной чувствительности отдельных субтипов клеток;

б) незначительный выход определенного типа клеток, который может быть обусловлен непреднамеренным избирательным удалением важного в функциональном отношении субтипа, что приводит в свою очередь к тому, что состав предположительно чистой клеточной субпопуляции не отражает ее реального состава в организме. Например, чистая популяция Т-лимфоцитов, из которой адгезией удалены Т-супрессоры, будет давать более выраженный иммунный ответ, чем существующий in vivo пул Т-клеток;

в) стимуляция или торможение тех или иных клеточных функций может иметь место вследствие разделения клеток, что приводит соответственно к усилению или ослаблению иммунного ответа. Имеются многочисленные примеры артефактов, связанные с розеткообразованием, очисткой на аффинных сорбентах, флюоресцентно-активационным разделением, агглютинацией лектинами и т. д.

Более подробно возможные причины артефактов будут рассмотрены в конце описания каждого метода.